2013年自考《微生物遺傳學》第七章考點



  第七章 抗性突變株的篩選及特殊性能變異株的篩選

  第一節 抗性突變株的篩選

  相對比較容易,只要有10*-6頻率的突變體存在,就容易篩選出來。有一次性篩選法和階梯性篩選法兩種手段。

  一、一次性篩選法

  指在對出發菌株完全致死的環境中,一次性篩選出少量抗性變異株。噬菌體抗性菌株常用此方法。

  二、階梯型篩選法

  藥物抗性即抗藥性突變株可在培養基中加入一定量的藥物或對菌體生長有抑制作用的物質。

  1、梯度平板法

  2、紙片擴散法

  第二節 抗性噬菌體的選育

  方法:

  1、自然誘變  以噬菌體為篩子,敏感菌株的孢子不經任何誘變由其自然突變為抗性菌株。

  2、誘發突變   敏感菌株先經誘變因素處理,然后將處理過的孢子液分離在含有高濃度的噬菌體的平板上,經誘變后的存活孢子中,如存在抗性變異菌株就能在此平板生長。

  2、抗噬菌體菌株的選育程序

  專一性噬菌體的獲得和純化——高效價噬菌體原液制備——菌株誘發突變——分離在含有噬菌體的平皿里挑取抗性菌落和搖瓶培養(加噬菌體)——分離到含噬菌體的平皿上挑取抗性菌落——抗性菌落特征性測試

  三、抗性噬菌體的特性研究

  1、抗性菌體穩定性實驗

  2、抗性菌株的產量性能(穩定,不比原始低太多,與原始持平左右)

  抗性表現:1、細胞結構的改變,防止噬菌體吸附侵入,2、生理代謝改變,噬菌體可以吸附侵入,但不能增殖。    (無論從自然突變或誘發突變所得到的康噬菌體菌株,在用于生產職之前,均需經過反復驗證,才能使用。)

  3、真正抗性與溶源性的區別實驗

  經選育的菌——(誘導)加敏感菌——出現噬菌斑的是假抗,不出現的是真抗。

  四、用于生產的抗性噬菌體應具備的條件

  1、產量不低于敏感株;2、不帶噬菌體(間接篩選法可以保證原始菌種不帶噬菌體);3、穩定好;4、不是溶源性。    (用過濾器過濾噬菌體和細菌)




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